我們知道，在細(xì)胞培養(yǎng)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)在實(shí)驗(yàn)儀器、培養(yǎng)基等等工作上都要耗費(fèi)不少的人力和體力。好在很久以前就有高人發(fā)明了細(xì)胞保存這個(gè)實(shí)驗(yàn)步驟，將暫時(shí)多出來(lái)的細(xì)胞冰凍保存，以zui大程度保存細(xì)胞活力。
(1)凍存細(xì)胞傳統(tǒng)方法:
冷存管置于4℃10分鐘--->-20℃30分鐘--->-80℃16～18小時(shí)(或隔夜)--->液氮槽vaporphase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。-20℃不可超過(guò)1小時(shí)，以防止胞內(nèi)冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
(2)程序降溫：
利用已設(shè)定程序的等速降溫機(jī)以-1～-3℃/分鐘之速度由室溫降至(-80℃以下)-120℃，再放在液氮槽vaporphase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。適用于懸浮型細(xì)胞與hybridoma之保存。
凍存細(xì)胞步驟：
(1)冷凍前24-48小時(shí)更換半量或全量培養(yǎng)基，使細(xì)胞處于指數(shù)生長(zhǎng)期。
(2)配制冷凍保存溶液(使用前配制)：另取一離心管，加入培養(yǎng)基、血清，逐滴加入二甲基亞砜(DMSO)至20%濃度，即制成雙倍的凍存液，置于室溫下待用。
(3)離心收集培養(yǎng)之細(xì)胞，用加血清的培養(yǎng)基重懸起細(xì)胞，取少量細(xì)胞懸浮液(約0.1ml)計(jì)數(shù)細(xì)胞濃度及凍前存活率。
(4)取與細(xì)胞懸液等量的凍存液，緩慢逐滴加入細(xì)胞懸液，并晃動(dòng)試管，制成細(xì)胞凍存懸液(DMSOzui后濃度為5～10%)，使細(xì)胞濃度為1～5×106cells/ml，混合均勻，分裝于已標(biāo)示*之冷凍保存管中，1～2ml/vial，并取少量細(xì)胞懸浮液作污染檢測(cè)。嚴(yán)密封口后，注明細(xì)胞名稱(chēng)、代數(shù)、日期。然后進(jìn)行凍存。
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