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研域詳解:細(xì)胞凋亡的形狀學(xué)檢測(cè)辦法說明
更新時(shí)間:2020-03-16   點(diǎn)擊次數(shù):1628次

1 · 光學(xué)顯微鏡和倒置顯微鏡

(1) 未染色細(xì)胞:凋亡細(xì)胞的體積變小、變形,細(xì)胞膜無缺但呈現(xiàn)發(fā)泡現(xiàn)象,細(xì)胞凋亡晚期可見凋亡小體。貼壁細(xì)胞呈現(xiàn)舒展、變圓、墜落。
 
(2) 染色細(xì)胞:常用姬姆薩染色、瑞氏染色等。凋亡細(xì)胞的染色質(zhì)濃縮、邊緣化,核膜裂解、染色質(zhì)切割成塊狀和凋亡小體等典型的凋亡形狀。
 
2 · 熒光顯微鏡和共集合激光掃描顯微鏡
 
一般以細(xì)胞核染色質(zhì)的形狀學(xué)改動(dòng)為目標(biāo)來評(píng)判細(xì)胞凋亡的發(fā)展情況。
 
Hoechst是與DNA特異結(jié)合的活性染料,貯存液用蒸餾水配成1mg/ml的濃度,運(yùn)用時(shí)用PBS稀釋成終濃度為2~5mg/ml。
 
DAPI為半通透性,用于慣例固定細(xì)胞的染色。貯存液用蒸餾水配成1mg/ml的濃度,運(yùn)用終濃度一般為0.5 ~1mg/ml。
 
效果評(píng)判:細(xì)胞凋亡過程中細(xì)胞核染色質(zhì)的形狀學(xué)改動(dòng)分為三期:Ⅰ期的細(xì)胞核呈波紋狀(rippled)或呈折縫樣(creased),部分染色質(zhì)呈現(xiàn)濃縮情況;Ⅱa期細(xì)胞核的染色質(zhì)高度凝集、邊緣化;Ⅱb期的細(xì)胞核裂解為碎塊,發(fā)作凋亡小體)。

3 · 透射電子顯微鏡觀察
 
細(xì)胞效果評(píng)判:凋亡細(xì)胞體積變小,細(xì)胞質(zhì)濃縮。凋亡Ⅰ期(pro-apoptosis nuclei)的細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)高度環(huán)繞,呈現(xiàn)許多稱為氣穴現(xiàn)象(cavitations)的空泡結(jié)構(gòu)(圖2);Ⅱa期細(xì)胞核的染色質(zhì)高度凝集、邊緣化;細(xì)胞凋亡的晚期,細(xì)胞核裂解為碎塊,發(fā)作凋亡小體。

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